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低温等离子体激发过硫酸氢钾灭活毛癣菌生物膜的实验

  有研究采用气压低温等离子体射流(APJ),以毛癣菌生物膜为模型进行了实验室杀灭试验,观察了气压等离子体在不同条件下杀灭生物膜的成果,同时观察了过硫酸氢钾对低温等离子体杀灭毛癣菌生物膜的促使作用。

  一、实验部分:

  1、等离子体处理生物膜的实验:

  ①设定等离子体条件:设定载气气体流量为1L/min,先将载气导入侧边管持续2min,以排出管内空气。将生物膜板孔直接置于载物台上距离射流口5mm位置。

  ②分组:将制得的生物膜分为5组,即阴性对照组;在生物膜上加过硫酸盐300μ,不经等离子体处理;生物膜样品直接经等离子体处理;生物膜上加300μL没菌水经等离子体处理;生物膜上加过硫酸盐300μL并保持3~5min经等离子体处理。

  ③等离子体处理方法:生物膜上加过硫酸盐生物膜样品的处理时间保持在3~5min。进行等离子体放电处理:启动低温等离子体射流处理5min。等离子体放电处理后,吸出加入的过硫酸氢钾溶液/没菌水,每个样品均用没菌盐水清洗3次,分别进行作用评价。

  2、灭活作用评价方法:

  ①平板培养法:等离子体放电处理之后,直接将整个盖玻片倒扣在SDA平板上于28℃培养5d,根据培养长出的平均菌落数评估等离子体对毛癣菌生物膜的杀灭率。

  ②荧光显微镜法:将上述清洗3次的生物膜样品加入200μ L SYTO9/P染料,以绿色荧光标记活细胞,以荧光标记死细胞。在暗室中染色30min后,使用1mL没菌盐水再次洗涤每个生物膜样品3次,然后用荧光显微镜观察。

  二、结果分析:

  从以上实验得出了,过硫酸氢钾对低温等离子体对毛癣菌生物膜的灭活作用的影响:

  1、SDA平板培养法检测结果

  结果表明,与未处理的生物膜样品相比,随着低温等离子体射流处理时间的增加,菌落逐渐减小;有过硫酸盐溶液存在时,菌落减少越加显明。结果提示,过硫酸盐对等离子体灭活毛癣菌生物膜有促使作用。等离子体放电3min灭活作用尚不显明,等离子体放电5min,直接处理、间接处理以及加过硫酸盐处理的3组的SDA平板上均未有菌落长出。结果提示,等离子体放电5min可整体杀灭毛癣菌生物膜。

  2、荧光显微镜检测结果

  毛癣菌生物膜经SYTO9/P染色后,在荧光显微镜下可见其分别被染成绿色(活菌)和(死菌)。荧光显微镜检测仍然表明,等离子体可杀灭毛癣菌生物膜;过硫酸氢钾可协同气压低温等离子体杀灭毛癣菌生物膜,且随着处理程度的增加,杀灭效率进一步增加,其结果与SDA平板培养法一致。